【化工機械設備網 熱點關注】近期，廈門大學研究團隊成功研發(fā)出一種熒光PCR新技術，將熒光PCR的單管檢測能力提高了至少一個數量級，推動了主流熒光PCR儀器檢測技術的發(fā)展。研究成果發(fā)表在《美國國家科學院院刊》(PNAS)雜志上。
作為目前最為成熟、臨床應用最廣泛的分子診斷技術，PCR(聚合酶鏈式反應)技術具有靈敏度高、特異性好、及時方便等優(yōu)點，在傳染性疾病檢測、腫瘤個體化診療、遺傳性疾病篩查、血液篩查等領域有著巨大的應用價值，已經成為許多臨床診斷的“金標準”。在疫情期間，PCR技術在病毒核酸檢測中發(fā)揮了重要作用，其發(fā)展也更受重視。
PCR技術發(fā)展至今已經衍生出多重PCR (multiplex PCR)、實時熒光定量PCR、數字PCR(digital PCR)等多種技術。其中第二代技術——實時熒光定量PCR是當前的主流。該技術通過特異性熒光探針實時監(jiān)測擴增片段熒光信號，同時實現了絕對基因表達和相對定量檢測。同時通過閉管檢測的模式降低了擴增產物的污染機會，節(jié)省時間和勞動力，有利于自動化的實現。
然而實時熒光定量PCR的檢測能力受限于儀器檢測通道數目，單個反應能檢測到的靶基因數量很難超過6個(2-4)。在PCR之后添加熔解分析步驟是研究者解決這一問題的嘗試，雖然在一定程度上增加了可檢測靶基因數目，但也存在檢測成本升高、檢測錯誤率增加等問題。靶基因檢測數量的局限使實時熒光定量PCR技術在涉及多靶點的復雜疾病檢測中難以發(fā)揮作用。
2022年2月24日，廈門大學生命科學學院研究團隊在《美國國家科學院院刊》(PNAS)雜志上發(fā)表了一項研究成果，報道了一種稱為“MeltArray”的單步、多重均相熒光PCR新技術。
該技術利用了熒光PCR反應中Taq DNA聚合酶的5‘-瓣狀內切酶活性，將位于引物下游的“媒介探針”切割，釋放出“媒介引物”，“媒介引物”結合到反應體系中的分子信標報告探針上。在Taq酶聚合活性作用下，“媒介引物”沿著分子信標延伸，生成具有特定熔點值的熒光雙鏈。由于每個分子信標可以允許多個“媒介引物”形成一系列具有不同熔點值的熒光雙鏈，單個MeltArray多重熒光PCR反應可檢測的總靶基因數目就等于反應中分子信標數量乘以其所容納的“媒介引物”數量。
為驗證MeltArray的多重檢測能力，研究者設計了多種檢測體系，包括人類Y染色體微缺失的20重檢測、確定大腸桿菌血清型的62重檢測、同時識別和定量呼吸道病原體的24重檢測、直腸癌組織樣本的KRAS突變微測序分析等，對應了分子診斷的遺傳病、傳染病和腫瘤分子診斷三大應用領域，均有良好的靈敏度和特異性。
在高通量測序技術出現后，靶基因檢測數量有限的實時熒光定量PCR通常被認為是“低端”的檢測技術。MeltArray不需要改變現有的熒光PCR儀器就極大增加了單個閉管實時熒光PCR一步法能檢測的最大靶基因數量，推動熒光PCR這一“老技術”再上“新臺階”，填補了長期存在于低階PCR和高通量檢測二者之間的技術空白。
(資料來源：科技部生物中心、IVD從業(yè)者網)
版權與免責聲明：1.凡本網注明“來源：化工機械設備網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-興旺寶合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工機械設備網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。 2.本網轉載并注明自其它來源（非化工機械設備網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點或和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。 3.如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
相關新聞
-
據數據顯示，2023年檢驗檢測機構總數達到53834家，相比上一年增長了2.02%，其中獲得資質認定的檢驗檢測機構有53015家，同比增長了3.76%。2023年，檢驗檢測行業(yè)全年實現營業(yè)收入4670.09億元，同比增長9.22%。- 2022-03-24 14:08:47
- 391
-
工信部透露，我國儀器儀表部分高端產品已經達到或者接近國際先進水平，在這個時代，更應該以新質生產力為核，搶抓高質量發(fā)展機遇。- 2022-03-24 14:08:47
- 189
-
化工儀器網梳理了北交所、上交所與深交所的公開信息，對2023年上市的儀器儀表及檢測設備企業(yè)進行了統(tǒng)計，2023年共有19家相關企業(yè)上市。- 2022-03-24 14:08:47
- 245
昵稱 驗證碼 請輸入正確驗證碼
所有評論僅代表網友意見，與本站立場無關