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二氧化碳培養(yǎng)箱使用要點及注意事項
點擊次數(shù)：167 發(fā)布時間：2014-7-3
二氧化碳培養(yǎng)箱是 現(xiàn)代大中型醫(yī)院進行科學(xué)研究*的重要設(shè)備，分布于醫(yī)院各個實驗室。它通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細胞組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如恒定的酸堿 度(pH值：7．2—7．4)，穩(wěn)定的溫度(37℃)，較高的相對濕度(95％)，穩(wěn)定的二氧化碳水平(5％)，來對組織、細胞、細菌進行體外培養(yǎng)的一種 裝置。常用的二氧化碳培養(yǎng)箱有兩種類型：氣套式和水套式。二氧化碳培養(yǎng)箱有兩條基本的要求：一是要求
二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供zui穩(wěn)定的控制，以便于其研究工作的進展；二是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進行有效的防范，并能夠定期消除污染，以保護研究成果，防止樣品損失。
1 二氧化碳培養(yǎng)箱基本工作原理
水套式二氧化碳培養(yǎng)箱的 溫度是通過電熱絲給水套內(nèi)的水加熱，再通過箱內(nèi)溫度傳感器來檢測溫度變化，使箱內(nèi)的溫度恒定在設(shè)置溫度。氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱的加熱是通過遍布箱體氣套層 內(nèi)的加熱器直接對內(nèi)箱體進行加熱的，又叫六面直接加熱。氣套式與水套式相比，具有加熱快，溫度的恢復(fù)比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點，特別有利于短期培養(yǎng)以及需 要箱門頻繁開關(guān)的培養(yǎng)。箱內(nèi)溫度一般設(shè)定在37℃左右。二氧化碳培養(yǎng)箱控制二氧化碳的濃度是通過二氧化碳濃度傳感器來進行的。二氧化碳傳感器用來檢測箱體 內(nèi)二氧化碳濃度，將檢測結(jié)果傳遞給控制電路及電磁閥等控制器件，如果檢測到箱內(nèi)二氧化碳濃度偏低，則電磁閥打開，二氧化碳進入箱體內(nèi)， 直到二氧化碳濃度達到所設(shè)置濃度，此時電磁閥關(guān)閉，箱內(nèi)二氧化碳切斷，達到穩(wěn)定狀態(tài)。二氧化碳采樣器將箱內(nèi)二氧化碳和空氣混合后的氣體取樣到機器外部面板 的采樣口，以隨時用二氧化碳濃度測定儀來檢測二氧化碳的濃度是否達到要求。目前大多數(shù)的二氧化碳培養(yǎng)箱是通過增濕盤的蒸發(fā)作用產(chǎn)生濕氣的(其產(chǎn)生的相對濕 度水平可達95％左右，但開門后濕度恢復(fù)速度很慢)。因為濕度蒸發(fā)面積越大，越容易達到zui大相對飽和濕度并且開關(guān)門后的濕度恢復(fù)的時間越短。所以濕度蒸發(fā) 面積大的培養(yǎng)箱較濕度蒸發(fā)面積小的培養(yǎng)箱容易保
持zui大相對飽和濕度。
2 一定要做好使用前的準(zhǔn)備工作
二氧化碳培養(yǎng)箱應(yīng) 由專人負責(zé)使用，操作盤上的任何開關(guān)和調(diào)節(jié)旋扭一旦固定后，不要隨意扭動，以免影響箱內(nèi)溫度，二氧化碳濃度，濕度的波動，同時降低機器的靈敏度。箱子的放 置要水平，避免陽光直射和灰塵等，要保證儀器周圍的氣流循環(huán)，后部及側(cè)面應(yīng)留出5 cm的空隙。加裝穩(wěn)壓電源保證電源電壓波動不超過220 V±10％。所加入的水必須是蒸餾水或無離子水，防止礦物質(zhì)儲積在水箱內(nèi)產(chǎn)生腐蝕作用，經(jīng)常檢查箱內(nèi)水是否足夠，水位應(yīng)加至“水位指示燈”滅燈時為止。使 用前箱內(nèi)應(yīng)用消毒酒精或碘溶液*擦洗，防止其他微生
物污染，導(dǎo)致實驗失敗。在房間安裝空調(diào)，使環(huán)境溫度保持在25~C左右。所使用的二氧化碳必須是純凈的，否則降低二氧化碳傳感器的靈敏度和污染二氧化碳過濾裝置。
3 正確充氣延長二氧化碳傳感器使用壽命
二氧化碳培養(yǎng)箱箱內(nèi)氣壓由二氧化碳氣體傳感器控制。二氧化碳傳感器正常反饋要求進氣壓為Medical Equipment Vo1．22，No．4 0．06 MPa。當(dāng)箱內(nèi)氣壓降低時，二氧化碳傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地開閉，向箱內(nèi)慢慢充氣，當(dāng)進氣壓達0．1 MPa時，自動停止調(diào)節(jié)。如充氣方法不當(dāng)，使進氣壓力增大，當(dāng)超過0．1 MPa甚至0．2 MPa壓力，會損傷二氧化碳傳感器。開始這種損傷效應(yīng)不明顯，不易察覺，反復(fù)錯誤操作，二氧化碳傳感器損傷累積zui終致命損壞，使氣壓調(diào)節(jié)失靈。因此，二氧 化碳傳感器壽命與二氧化碳進氣壓大小有關(guān)，只要做好進氣壓調(diào)節(jié)，就能保護二氧化碳傳感器性能。二氧化碳傳感器價格昂貴，更換不易，所
以一定要做好進氣壓調(diào)節(jié)，延長二氧化碳傳感器使用壽命。
4 做培養(yǎng)時注意培養(yǎng)箱濕度
箱內(nèi)濕度對于培養(yǎng)工作來說是一項非常重要然而又經(jīng)常被忽略的因素。因為飽和濕度環(huán)境可以避免培養(yǎng)液中二氧化碳逃逸，培養(yǎng)液中pH值穩(wěn)定，有利于細胞生長，足夠的濕度水平并且要有足夠快的濕度恢復(fù)速度(如在開關(guān)門后)才能保證不會由于過度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。所以二氧化碳培養(yǎng)箱使 用過程中，在箱內(nèi)托盤中放一定量的滅菌水(3／2至全盤)，使箱內(nèi)成為飽和濕度環(huán)境。如使用者忘記補加水，使培養(yǎng)細胞處于低濕度甚至干熱環(huán)境中，培養(yǎng)液二 氧化碳氣體易揮發(fā)，液體pH值升高，影響細胞生長，在工作中要力求避免此問題發(fā)生。樣本多時，箱內(nèi)分區(qū)存放，培養(yǎng)物用筐或瓷盤存放，這樣存取快速，縮短開 門時間，減少箱內(nèi)氣體和濕度變化，節(jié)省氣體，穩(wěn)定了細胞生長環(huán)境。
5 防止二氧化碳培養(yǎng)箱污染做好箱內(nèi)消毒二氧化碳培養(yǎng)箱污染是導(dǎo)致細胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素，所以要減少和防止污染的發(fā)生，主要途徑是盡量減少微生物可以生 長的區(qū)域和表面，采取消毒措施。例如，針對箱內(nèi)濕熱環(huán)境易滋生細菌等問題，我們采用在1000 mL水中加2 mL新潔爾滅液，定期用酒精和紫外線消毒箱內(nèi)空氣，培養(yǎng)物酒精擦拭人箱內(nèi)，盤里的水至少要一周換一次，控制污染，可以維持適應(yīng)的蒸發(fā)作用，減少箱內(nèi)微生物 滋生速度。為了培養(yǎng)箱免受污染并且保證儀器箱體內(nèi)的生物清潔性，有些二氧化碳培養(yǎng)箱設(shè)計了自動排除污染裝置來有效防止污染的產(chǎn)生。目前有多種消毒滅菌方 式， 如帶有紫外消毒功能的CO2培養(yǎng)箱。還有的設(shè)計生產(chǎn)了HEPA過濾器能過濾培養(yǎng)箱內(nèi)空氣，可過濾除去99．97％的0．3／an以上的顆粒，此外，還有設(shè) 計了能使箱內(nèi)達到高溫濕熱的環(huán)境從而殺死污染微生物，達到消毒滅菌目的的培養(yǎng)箱。
6 二氧化碳培養(yǎng)箱零 點飄移的監(jiān)控和零點的調(diào)整培養(yǎng)箱使用過程中，二氧化碳零點會發(fā)生自然飄移現(xiàn)象，這種現(xiàn)象不能在箱面氣體顯示框中表現(xiàn)出來，使用者也不易覺察到飄移結(jié)果。二 氧化碳零點是否飄移，可通過二氧化碳氣體測試儀，從控制盤上的采樣口可以采到培養(yǎng)箱內(nèi)的氣體，然后用氣體色譜儀就可以測到二氧化碳濃度了。二氧化碳培養(yǎng)箱 零點的調(diào)整的步驟(一般以空氣為標(biāo)準(zhǔn)來校零， 每半年進行一次， 以Thermo3111型為例)：
(1)把二氧化碳濃度設(shè)定值設(shè)為零，目的是不讓鋼瓶中二氧化碳進入箱內(nèi)。
(2)打開所有的門5 min，往水盆內(nèi)加上水，關(guān)上所有的門，穩(wěn)定12 h以上。
(3)等溫濕度充分穩(wěn)定后，觀察二氧化碳濃度顯示值是否為零，若不為零，校正至零(按Mode
鍵至Cal檔，按左鍵或右鍵選擇至顯示“C02 CALX．X”，用上鍵或下鍵把數(shù)值調(diào)為零，然后按Enter鍵確認)。
(4)重新把二氧化碳濃度設(shè)定值設(shè)回(如5．0％)。