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一、在組織培養(yǎng)中污染來(lái)源
1. 植物本身具有：
（1）植物病原菌
有些作物的病害已被透徹研究，因此在大量繁殖時(shí)，可立即檢查出來(lái)，但有些則否，造成若有污染時(shí)，不知來(lái)源為何。

（2）和植物有關(guān)的菌類
有修植物本身便會(huì)和一些菌種共生，或是寄生于植物內(nèi)部。
 
2. 植物所帶入的污染：內(nèi)在污染源
許多植物表面或大氣中生存的微生物，可經(jīng)由植物自然的開(kāi)口或傷口進(jìn)如植物內(nèi)部，而有一些兼性腐生菌或絕對(duì)寄生菌，可藉由載體或是擁有一些侵入的機(jī)制侵入植物內(nèi)部，依其存在的地方分為

1. 細(xì)胞內(nèi)－inter
2. 細(xì)胞間隙－interacellular
種類有：virus/bin毒、viroids類病毒、prokarytoes原核生物、fungi真菌、柔膜綱（ex:mite）、立克次體。

3. 操作室：外在污染源
在組織大量培養(yǎng)下，除了植物本身外，大部分最有可能的污染來(lái)源便是來(lái)自操作室。依其可能原因分析為：

（1）空氣
在操作室中，未過(guò)濾空氣帶有大量的微生物，隨者操作人員或植株接觸時(shí)，而污染培養(yǎng)皿。故在國(guó)外對(duì)于操作室內(nèi)空氣的清潔度分為四種等級(jí)：
ClassⅠ.沒(méi)有容易培養(yǎng)的微生物，和作物之主要病原菌
Ⅱ.沒(méi)有容易培養(yǎng)的微生物，和作物特殊病原菌
Ⅲ.沒(méi)有容易培養(yǎng)的微生物
Ⅳ.未做檢測(cè)

（2）不*的滅菌設(shè)備或技術(shù)
因?yàn)槭褂脺缇?的設(shè)備或是技術(shù)，而導(dǎo)致植株或培養(yǎng)皿的污染，例如：有些酵母菌，可避免酒精消毒，還有一些會(huì)產(chǎn)生內(nèi)孢子，而避免火焰消毒。

（3）人員
在整個(gè)操作室內(nèi)，人員可說(shuō)是最大的帶菌者，其不管在毛發(fā)或是衣服等，都隱藏屬不清的菌。在進(jìn)入操作室前，最好能將作業(yè)人員清潔處理，然后換上脫鞋，或是將塵土去掉。

（4）細(xì)縫的存在
因?yàn)槿舨僮魇矣屑?xì)縫的存在，則造成外果氣體直接流入，使得空氣中菌數(shù)增加。

（5）操作臺(tái)上的濾網(wǎng)不干凈
因?yàn)槭褂眠^(guò)久，或不當(dāng)保養(yǎng)，而造成濾網(wǎng)壞掉，而產(chǎn)生更多的污染。

（6）蹣及薊馬的存在
此為珠形網(wǎng)，具有活動(dòng)能力，能到處跑來(lái)跑去。因此常造成散亂的污染。

4.栽培過(guò)程污染
在栽培室，組培瓶外和外界氣體交換時(shí)，亦會(huì)有污染進(jìn)入。污染機(jī)率取決于空氣中帶菌密度與組培瓶空氣交換率。

二、污染的種類及形式
1. 污染的形成
依據(jù)污染的來(lái)源，可將污染分為三個(gè)形式：
a.由植物內(nèi)部或病原菌所造成的污染
植物內(nèi)部或病原菌所造成的污染，所呈現(xiàn)是系統(tǒng)性，及從stageo~stage4中都可發(fā)現(xiàn)，而且占有一定的百分比。
b. 在制造時(shí)所造成的污染
如因蹣或是空氣中的關(guān)系造成的污染，其所表現(xiàn)的方式是散亂（random）性非系統(tǒng)性，且不集中于某一地方，占的百分比也不一定，是機(jī)率性。
c. 技術(shù)上的失誤
其呈現(xiàn)方式有一定性，例如由此工作臺(tái)所生產(chǎn)得植株都被污染，表現(xiàn)為帶狀性，可用卷標(biāo)方式來(lái)追蹤，以進(jìn)而改善。

2. 污染的來(lái)源分類
A、污染的種類，以總體來(lái)說(shuō)可分為下列幾種：
a.病毒(virus)－常存在植物內(nèi)部。
b.(viroids)常存在植物內(nèi)部
c.細(xì)菌－在組織培養(yǎng)中又分依其來(lái)源和所在地方分類如下：
(a)phlem-eimited生長(zhǎng)于韌皮部 xylem-eimited生長(zhǎng)于木質(zhì)部
(b)植物病原細(xì)菌
(c)空氣中存在的細(xì)菌，但因植物有傷口，或是營(yíng)養(yǎng)豐富的地方，可分為植物表面的細(xì)菌或植物內(nèi)部的細(xì)菌。
例如：Bacillus spp.可抗熱，在不*滅菌的玻璃器皿中可發(fā)現(xiàn)。
(d)菌質(zhì)體
是一種像細(xì)菌的微生物，但是本身沒(méi)有細(xì)胞壁，可以在培養(yǎng)基培養(yǎng)，亦可用特殊的抗生素（四環(huán)霉素）抑制其生長(zhǎng)。其種類有microplasm與spiroplasm。
(e)真菌
在植物病害中，真菌所引起的病害特別多且嚴(yán)重，且因其會(huì)產(chǎn)生孢子，所以會(huì)隨著空氣飄散。一旦落于適當(dāng)?shù)沫h(huán)境下，一粒小小的孢子便會(huì)擴(kuò)大成一個(gè)菌落，污染整個(gè)組織培養(yǎng)瓶。例如常見(jiàn)的酵母菌，其菌落為粉紅色，若有其出現(xiàn)，則其污染來(lái)源可能來(lái)自空氣。
(f)蹣或薊馬
此為細(xì)小的微生物，具有活動(dòng)能力，喜歡吃菌絲。在國(guó)內(nèi)使用期限較久的組培場(chǎng)中常出現(xiàn)此問(wèn)題。
(g)立克次體
目前未清楚其污染方式。

B、以培養(yǎng)難易區(qū)分污染源
1. 在培養(yǎng)基中易培養(yǎng)菌類
細(xì)菌，真菌，蹣。
2. 在培養(yǎng)基中不易培養(yǎng)的菌類
病毒，類病毒，立克次體，菌質(zhì)體。
在組織培養(yǎng)過(guò)程中，常造成污染或是造成威脅的菌類，稱為培養(yǎng)菌類。因常為腐生菌，且營(yíng)養(yǎng)需求不高（隨便吃，隨便活）所以常造成成本的增加。而且污染后，常使培養(yǎng)基的pH值降低，洋菜無(wú)法凝結(jié)，而使植物無(wú)法生長(zhǎng)或是產(chǎn)生有毒物質(zhì)或副產(chǎn)品，使得植物生長(zhǎng)緩慢，或是干脆就在植物上生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基上不易培養(yǎng)或是不能培養(yǎng)的菌種，就不會(huì)造成太大的威脅。

C、各種菌種其主要傳播方式
1. 病毒，類病毒，菌質(zhì)體－常利用機(jī)械或利用有載體傳播。
2. 細(xì)菌－可經(jīng)人力，氣流或水，及昆蟲等傳播。
3. 真菌－亦同上，但孢子可經(jīng)空氣傳播。
4. 薊馬－同上，具活動(dòng)力，自由運(yùn)動(dòng)，應(yīng)慎防出現(xiàn)。

D、依其菌落生長(zhǎng)出現(xiàn)的快慢區(qū)別
1. 可見(jiàn)的菌落在組織培養(yǎng)中。一些易培養(yǎng)的菌類，其生長(zhǎng)特性為快速蔓延整個(gè)組培瓶。但此種污染可利用工作人員之視覺(jué)觀察將之偵測(cè)出來(lái)將之銷毀，對(duì)后代植株造成威脅不大。
2. 潛藏的菌落－在組織培養(yǎng)中有些不易培養(yǎng)或是在植物內(nèi)部寄生或共生的菌類或病原菌，在培養(yǎng)時(shí)沒(méi)有表現(xiàn)出來(lái)，但是有存在或只有很微弱的表現(xiàn)，但是未被察覺(jué)出來(lái)。于是便造成了對(duì)后代植株的重大威脅及成本的增加。

三、污染種類的鑒定方式
1. 針對(duì)培養(yǎng)難易菌種鑒定方式
A、針對(duì)易培養(yǎng)的菌種：其種類為真菌，細(xì)菌
a.就真菌而言，主要是利用顯微鏡，視其孢子形態(tài)、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、及菌絲有無(wú)隔膜、還有細(xì)胞壁之形成加以鑒定。目前亦有使用DNA探針加以分析。
b.就細(xì)菌而言，則是利用其特殊的生化反應(yīng)，或是利用選擇性的培養(yǎng)基。目前亦有如用fatty acid profiling技術(shù)和商業(yè)化的test kits加以鑒定。

B、不易培養(yǎng)的菌種，如菌質(zhì)體，病毒，類病毒。
a.就菌質(zhì)體而言，主要是觀察其在培養(yǎng)基上菌落的形態(tài)。
b.病毒而言，分析其核酸的組成與例子的外形。
類病毒因沒(méi)有套膜，以上兩種常利用其DNA有同源性而做探針偵測(cè)。

C、病原菌的偵測(cè)
利用柯霍氏法來(lái)測(cè)其病源性。而利用分子診斷，如血清、ELISA、DNA序列、核酸的探針以鑒定種類。

2. 鑒定菌種常用的方式與應(yīng)用的微生物種類
方法                     目標(biāo)微生物
無(wú)種別性
指示培養(yǎng)               所有可培養(yǎng)的細(xì)菌
DNA/RNA 螢光染色法         菌質(zhì)體及有關(guān)原核生物
Leaf dip electon microscopy        長(zhǎng)條狀的病毒，其數(shù)目較多者亦適用
電泳                 類病毒
有種別性
ELISA                 細(xì)菌及病毒
PALIAS                細(xì)菌及病毒
ISEM                  病毒
DNA探針                所有微生物
快速診斷的 kits             細(xì)菌
Fatty acid profiling            細(xì)菌

3. 一般對(duì)細(xì)菌的基本測(cè)試
a.Gram stain
b.形狀
c.游動(dòng)性
d.催化酵素的測(cè)試
e.氧化酵素的測(cè)試
f.熱穩(wěn)定性
g.行氧化作用或發(fā)酵作用

四、針對(duì)污染源常使用的防治方法
A. 種類
1. 熱療－對(duì)病毒較有效但須花費(fèi)時(shí)間。處理時(shí)，需6-12星期在30-40℃。
2. 冷療法－亦對(duì)病毒有效。
3. 利用抗生素。
4. 以分生組織，不帶病毒等污染源。
5. 利用培養(yǎng)基中高糖，高鹽的濃度。
6. 利用抗并du藥物。
7. 營(yíng)養(yǎng)需求不同。
8. 利用水。
9. 抽樣檢測(cè)。

B、防治方法之效果討論
1. 熱療法及冷療法
對(duì)病毒有效，但須花時(shí)間處理，例如：熱療法處理時(shí)間需花6-12星期在30-40℃。

2. 利用抗生素
這是目前較常用的方法，但是在抗生素加入培養(yǎng)基，其有效濃度常因植物具有半滲透功能，而使?jié)舛葻o(wú)法達(dá)到有效濃度。使用抗生素時(shí)，需注意下列事項(xiàng)：
（1）要知道抑制的微生物為何，再使用抗生素，及對(duì)癥下藥。
（2）要決定最小抑制濃度，以降低成本。
（3）要確定抗生素不會(huì)對(duì)植物造成并害或突變。
（4）確定抗生素在培養(yǎng)基上是否有作用。
（5）使用時(shí)，常因需要而多種混合或交替使用。
（6）有些抗生素在某些國(guó)家是禁止使用，使用前必須做詢問(wèn)此藥劑是否合法使用。

使用抗生素的缺點(diǎn)
（1）可能對(duì)哺乳類動(dòng)物有害。
（2）若是使用生長(zhǎng)期較長(zhǎng)的植物，微生物亦有抗藥性產(chǎn)生。
（3）容易錯(cuò)誤使用：沒(méi)有針對(duì)微生物而使用各種不同的抗生素。