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大鼠雌激素α受體受(ER-α)試劑盒
閱讀:58 發(fā)布時間:2019-6-24提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 18KB |
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大鼠雌激素α受體受(ER-α)試劑盒
該試劑盒以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測大鼠子宮及相關(guān)樣本內(nèi)的特異性雌激素α受體(ER-
α)抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所
用的雌激素α受體(ER-α)一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異
性結(jié)合,后加入 HRP-SA,形成抗原—特異一抗—*化二抗—HRP-SA 復(fù)合
物,顯微鏡下觀察成像。
三羥基氨基甲烷 1.21g
氯化鈉 7.6g
加蒸餾水 800mL,濃鹽酸調(diào) pH 值至 7.2~7.4,后定容至 1000mL TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積比)
2.抗原修復(fù)液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液)
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸 0.38g
檸檬酸三鈉 2.45g
加蒸餾水 900mL,濃鹽酸調(diào) pH 值至 6.0,后定容至 1000mL
或:0.5M EDTA 修復(fù)液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
加蒸餾水 700mL,用 10mM NaOH 調(diào) pH 值至 8.0,后定容至 1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL
4. Tween 20 5 mL
注意事項:
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的 Tween 20,否則會
影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封
片。
附 1:
抗原修復(fù)方法
常用抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復(fù)液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修復(fù)法酶消化修復(fù)
切片脫蠟水化處理,TBS 沖洗,在組織上滴加*或*,37℃孵育
20~30min 后 TBS 沖洗即可。
二、微波抗微波 原修復(fù)法
微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波 10~15min,取出微波
盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,
須自行調(diào)整。
三、直接高壓抗原修復(fù)法
取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復(fù)
液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時 1.5~2.5min 即可脫離熱源,自
然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。
四、隔水式高壓抗原修復(fù)法
不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸
騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時
4~8 min 即可關(guān)閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用
于較難檢測或核抗原的修復(fù)。