信帆明星產(chǎn)品：黃曲酶毒素總量(Aflatoxin Total)ELISA 檢測試劑盒???????

信帆生物供應(yīng)黃曲酶毒素總量(Aflatoxin Total)ELISA 檢測試劑盒，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，靈敏度高，效果好，適用于實驗室檢測，也可以用于農(nóng)場，飼料混合車間等測定，大家歡迎隨時咨詢

黃曲酶素總量(Aflatoxin Total)ELISA 檢測試劑盒說明書

【概要】

黃曲酶毒素是一類真菌（主要是黃曲和寄生曲霉）代謝 的有毒產(chǎn)物，主要存在于谷物，堅果，棉籽以及一些與人類血 液，動物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。黃曲酶毒素以 AFB1、AFB2、 AFG1 和 AFG2這四種毒素為主，黃曲酶毒素總量一般是指這 四種毒素的總量。它們是 I 類致癌物，被證明對人和動物的肝 臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害，是一類毒性很強(qiáng)的致 癌物質(zhì)。因此，必須對其進(jìn)行及時檢測監(jiān)控，目前主要的檢測 手段是高效液相色譜法（HPLC）。

本產(chǎn)品是基于免疫競爭法檢測原理建立的一種快速定量 檢測黃曲總量(Aflatoxin Total，AFT)的試劑盒。它具有簡單、 快速，無需特殊儀器設(shè)備等優(yōu)勢，既可以用于實驗室檢測，也 可在農(nóng)場、飼料混合車間等進(jìn)行實地測定。

【適用范圍】

本試劑盒可定性、定量檢測米、面、油、堅果、辣椒等糧 油及其加工產(chǎn)品和飼料中的黃曲酶毒素總量。

【試驗原理】

本測試盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附 ELISA 原理，通過抗 黃曲酶毒素抗體與酶標(biāo)抗原、待測抗原的競爭免疫反應(yīng)以 及酶的催化顯色反應(yīng)相結(jié)合來檢測 AFT，樣本吸光值與其 所含 AFT 的含量成負(fù)相關(guān)，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，再乘以其對應(yīng)的 稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中 AFT 的含量。

【試劑盒組成】

1. 96 孔板（8 孔*12 條）

2. AFT 標(biāo)準(zhǔn)溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）

0 ng/mL,0.1ng/mL,0.25 ng/mL, 0.75 ng/mL, 2.5 ng/mL

3. AFT 酶標(biāo)抗原 1 瓶.........................................................6mL

4. 底物液 1 瓶......................................................................6mL

5. 顯色液 1 瓶......................................................................6mL

6. 終止液 1 瓶......................................................................6mL

7. 濃縮洗滌液 （20×）1 瓶............................................20mL

8. AFT 濃縮樣品稀釋液 （10×） 1 瓶...........................20mL

注：48 孔型號試劑盒內(nèi)容物數(shù)量、體積略有差別。

【需要而未提供的設(shè)備和試劑】

----酶標(biāo)儀 450nm

----振蕩器

----離心機(jī)

----粉碎機(jī)

----天平：感量 0.01g

----微量移液器：單道 20?L～200?L、100?L～1000?L

----甲醇

----石油醚或正己烷

----去離子水

注：以上儀器均可代購

【試劑配制】

洗滌工作液： 將濃縮洗滌液用去離子水按 1:19 體積比進(jìn)行 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。

樣品稀釋液Ⅰ： 將 AFT 濃縮樣品稀釋液用去離子水按 1:9 體積比進(jìn)行稀釋（1 份濃縮樣品稀釋液+9 份去離子水）。

樣品稀釋液Ⅱ：1.5mL 甲醇+8.5mL 樣品稀釋液Ⅰ。 70%甲醇-水：取無水甲醇，用去離子水按 7:3 體積比例稀釋 （7 份無水甲醇＋3 份水）

【樣本前處理步驟】

一、玉米、大米、麥類等谷物處理方法（稀釋倍數(shù)：20 倍）

1. 取 5.0g 粉碎好的樣品，加入 25mL 70%甲醇-水，混勻；

2. 充分振蕩 15min 后過濾或 4000rpm 離心 5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以 1:3 稀釋（例：0.5mL 濾液+1.5mL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 移取該液 50uL 進(jìn)行檢測。

二、花生、食用油、豆類等處理方法（稀釋倍數(shù)：20 倍）

1. 取 5.0g 粉碎好的樣品或稱取 5.0g 油樣，加入 25mL 70%甲 醇-水和 20mL 石油醚或正己烷，混勻；

2. 充分振蕩 15min 后過濾于分液漏斗中，靜止分層；

3. 取下層甲醇水提取液，用樣品稀釋液Ⅰ以 1:3 稀釋（例： 0.5mL 濾液+1.5mL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待

測樣液；

4. 移取該液 50uL 進(jìn)行檢測。

三、醬油、醋等處理方法（稀釋倍數(shù)：20 倍）

1. 取 5.0g 樣品，加入 25mL 70%甲醇-水，混勻；

2. 充分振蕩 15min 后過濾或 4000rpm 離心 5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以 1:3 稀釋（例：0.5mL 濾 液+1.5mL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 稀釋后的待測樣液需 pH 值約 7.0 左右，移取該液 50uL 進(jìn) 行檢測。

四、麩皮等飼料原料處理方法（稀釋倍數(shù)：40 倍）

1. 取 5.0g 粉碎好的樣品，加入 50mL 70%甲醇-水，混勻；

2. 充分振蕩 15min 后過濾或 4000rpm 離心 5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以 1:3 稀釋 （例：0.5mL 濾液+1.5mL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 移取該液 50uL 進(jìn)行檢測。

五、濃縮或配合飼料等處理方法（稀釋倍數(shù)：20 倍）

1. 取 5.0g 粉碎好的樣品，加入 25mL 70%甲醇-水，混勻；

2. 充分振蕩 15min 后過濾或 4000rpm 離心 5-10min；

3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以 1:3 稀釋 （例：0.5mL 濾液+1.5mL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；

4. 稀釋后的待測樣液需 pH 值約 7.0 左右，移取該液 50uL 進(jìn) 行檢測。

注意：若樣品中 AFT 偏高，建議將樣品提取液先用樣品稀釋 液Ⅰ以 1：3 稀釋，再用樣品稀釋液Ⅱ進(jìn)一步稀釋后檢 測。

【檢測步驟】

一、測定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫（20～25℃）。

2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置 2～8℃。

3. ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致 性，正確的洗板操作是 ELISA 操作中的要點。

4. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋 住微孔板。

二、操作步驟：

1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min 以上，液體試劑使用前均須搖勻。

2. 取出所需數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中， 放置于 2~8℃冷藏。不可冷凍。

3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。

4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔編號，建議每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品 做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5. 每孔加入 250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置 40s 左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。

6. 分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液/待測樣液 50?L 到對應(yīng)的微孔中，再加 入酶標(biāo)抗原 50?L/孔，輕輕振蕩混勻，遮蓋后 37℃恒溫 培養(yǎng)箱中反應(yīng) 30min。。

7. 小心揭開蓋板，甩掉反應(yīng)液，加入洗滌液 250μL/孔充分 洗滌 5 次，每次間隔 40s，用吸水紙拍干。

8. 每孔分別加入底物液和顯色液各 50μL，輕輕震蕩混勻， 遮蓋后 37℃恒溫培養(yǎng)箱中顯色 15min。

9. 加入終止液 50?L/孔，輕輕震蕩混勻，設(shè)酶標(biāo)儀于 450nm 處讀取每孔 OD 值。。 (若無酶標(biāo)儀，則不加終止用目測法可進(jìn)行判定)。

【結(jié)果判定】

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

用酶標(biāo)儀測得每孔的光密度值(A)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過 準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確定量樣品中 AFT 含量。 標(biāo)準(zhǔn)曲線：橫坐標(biāo)為 AFT 標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù)，縱坐標(biāo)為百 分比 （即各標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔光密度值除以 0 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)液 孔光密度值(A0)再乘以 100%所得， 光密度值(標(biāo)準(zhǔn)孔或樣品 孔) ／光密度值(A0)×100%=％(縱坐標(biāo))）。相應(yīng)每個樣品的 AFT 濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數(shù)據(jù)處理軟

件進(jìn)行計算。

備注：試劑盒初篩后，若出現(xiàn)陽性結(jié)果，建議用仲裁法進(jìn)一步 確證。

【注意事項】

1. 試劑及樣本沒有恢復(fù)到室溫（20~25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn) 的 OD 值偏低。

2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn) 曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng) 立即進(jìn)行下一步操作。

3. 每種試劑使用前均需搖勻。

4. 反應(yīng)終止液為 2M 硫酸，避免接觸皮膚。

5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有 效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6. 儲存條件：試劑盒保存于 2~8℃，不能冷凍，將不用的 微孔板重新真空密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的顯色劑對光敏 感，因此要避光保存。

7. 試劑變質(zhì)的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì)， 應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于 0.5 （A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8. 對玻璃器皿和 AFT 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v） 溶液浸泡過夜。

信帆明星產(chǎn)品：黃曲酶毒素總量ELISA 檢測試劑盒???????