中文名稱：鴨DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)ELISA試劑盒

鴨DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A(DNMT3A)ELISA試劑盒檢測(cè)樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織勻漿及相關(guān)生物液體

血清：不含抗凝劑的/含促凝劑。（通常為紅色、黃色、橘色管蓋的）

血漿：含抗凝劑。（通常為綠色、紫色管蓋的 ）

樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃(3個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，避免反復(fù)凍融。在檢測(cè)前，冷凍過的樣本應(yīng)緩慢地融化并離心除去凍融過程產(chǎn)生的沉淀物。

細(xì)胞樣本裂解方案

貼壁細(xì)胞裂解方法

單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提?。?/span>

1、倒掉培養(yǎng)液。

2、每瓶細(xì)胞加5ml 4℃預(yù)冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放輕輕搖動(dòng)1min洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液。重復(fù)以上操作兩次，共洗細(xì)胞三次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置于冰上。

3、按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），搖勻置于冰上。（PMSF要搖勻至無結(jié)晶時(shí)才可與裂解液混合。）

4、每瓶細(xì)胞加400 μ 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來回?fù)u動(dòng)。

5、裂解完后，用干凈的刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)（動(dòng)作要快），然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。（整個(gè)操作盡量在冰上進(jìn)行。）

6、于4℃下12000rpm離心5min。（提前開離心機(jī)預(yù)冷）

7、將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移倒0.5min的離心管中放于－20℃保存。

懸浮細(xì)胞裂解方法

1. 培養(yǎng)1×106-1×107個(gè)細(xì)胞；

2. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml圓形離心管，4?C, 500g離心5min；

3. 小心去除上清，加入5ml預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞，4?C, 500g離心5min；

4. 盡可能多的去除上清，小心不要碰到細(xì)胞沉淀。

5. 在上步驟獲取的細(xì)胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。

6. 吹吸混勻8-10次，冰上孵育5min；

7. 將所有細(xì)胞轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管；

8. 4?C, 14000g（離心機(jī)大轉(zhuǎn)速）離心10min；

9. 將上清轉(zhuǎn)移到新管中。該上清可立即用于檢測(cè)或者保存在-80?C。

10. 按照多因子檢測(cè)試劑盒操作方法檢測(cè)。樣本孔加入25ul細(xì)胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer。

可選步驟：

  建議細(xì)胞裂解后上清進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)。我們推薦使用Lowry法蛋白定量檢測(cè)。建議將所有樣本使用預(yù)冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer調(diào)整樣本蛋白濃度方為4-8 mg/ml。